酶联免疫吸附试验的原理和过程是什么？

酶联免疫吸附测定的原理是首先将酶分子与抗体或抗原结合。这种组合不会改变抗体和抗原的免疫学特性，同时保留酶的活性。然后用酶标记的抗体或抗原与吸附在固相载体上的已知抗原或抗体特异性结合。比较后，添加底物溶液以发生化学反应。

ELISA 是一种酶联免疫吸附测定法。用于检测固相板孔内助孕被的待测抗原（或抗体）。即用酶标记抗体，将已知的抗原或抗体吸附在固相载体的表面，从而在固相载体的表面进行抗原抗体反应。通过洗涤的方法洗掉液相中的游离成分，比较后酶作用于固相载体表面。底物显色后判断结果。显色反应的深度与标本中相应抗体或抗原的量成正比。这种显色反应可以通过ELISA检测器进行定量测定，它结合了酶化学反应的灵敏性和抗原抗体反应的特异性，使ELISA法成为特异且灵敏的检测方法。酶联免疫吸附测定是应用比较广泛的酶免疫测定技术。常用的ELISA方法有双抗体夹心法和间接法。前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异性抗体。更多相关知识阅读参考：不检查就打HPV疫苗有问题吗？在寄生虫病方面，用于疟原虫、阿米巴原虫、线虫病、锥虫病、血吸虫病、囊尾蚴病、弓形虫病、肺吸虫病、肝吸虫病、血丝虫病、旋毛虫病等的血清学诊断，对人类和兽医都有重要意义。在病原微生物方面，已用于检测链球菌、沙门氏菌、布鲁氏菌、结核杆菌、麻风杆菌、霍乱弧菌、淋病奈瑟菌、念珠菌等抗体，还可用于破伤风抗毒素、霍乱弧菌抗毒素。可以通过测量和检测斑疹伤寒立克次体感染后的抗体来进行诊断。立克次体还可用于鉴定密切相关的物种。据报道，它还可用于检测鹦鹉热衣原体抗体。已检测的病毒抗体检测报告助孕括流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹、风疹、轮状病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、EB病毒、腺病毒、肠道病毒、脑炎病毒、黄热病病毒、狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒等.它们的灵敏度超过了目前常用的检测方法。在免疫疾病方面，有测量自身疾病抗体和诊断过敏的试验，例如检测各种过敏原的抗体、DNA抗体、甲状腺球蛋白抗体、红斑疤痕抗体等。在卫生方面，可以用来检测食品中的葡萄球菌肠毒素、沙门氏菌毒素等。 注意事项1、底物：各种酶对底物具有特异性，因此使用不同类型的酶需要不同的底物。一旦确定了酶缀合物（例如AP 或HRP），可用底物的范围就非常有限。如何在这个有限的底物范围内选择合适的底物，应基于以下条件： (1)底物在被酶催化之前应是无色的，但在被酶催化后应具有明显的颜色。变化，以便可以清楚地区分结果； (2)显色后易干燥洗脱； (3)显色产品必须稳定，定量时产生的有色物质应是可溶的； (4)价廉、易得且无毒。因此，对于AP酶缀合物，一般使用磷酸硝基苯酯。显色后变成橙色，颜色稳定。用2mol/L NaOH终止反应，在403nm波长处测定O.D值。 2. 去污剂和稀释剂：为了比较大限度地提高特异性结合抗体的量，微反应板孔上应有稍微过量的抗原。然而，在孵育或洗涤过程中，部分吸附的抗原可能会从固相载体上被洗掉。

结果，被测血清中添加的除特异性抗体以外的蛋白质很可能被吸附到原来助孕被抗原孔的空白区域，增加背景颜色，产生假阳性反应。这是限制ELISA 特异性的一个因素。因此，许多学者在稀释剂和去污剂中添加各种保护性抑制剂来抑制非特异性蛋白质的竞争吸附。检查过程的基本方法是将已知的抗原或抗体吸附到固相载体（聚苯乙烯微反应板）表面，让酶标抗原抗体反应在固相表面进行，并用洗涤剂清洗。去除液相中游离离子的方法。成分被洗掉。根据ELISA所使用的固相载体分为三大类：一是以聚苯乙烯微孔板为载体的ELISA，也就是我们通常所说的ELISA（微孔板ELISA）；另一种是以硝酸纤维素膜为载体的ELISA，称为斑点ELISA（Dot-ELISA）；另一种是采用疏水性聚酯布作为载体的ELISA，称为布ELISA（C-ELISA）。在微孔板ELISA中，根据其性质的不同，分为间接ELISA、双抗体夹心ELISA、双夹心ELISA、竞争ELISA、封闭ELISA和抗体捕获ELISA。了解更多详情请点击：无忧怀孕